关键词：血管平滑肌细胞；增殖；GSTp；GSTm

　　ComparisonoftheinhibitionofVSMCsproliferationbyGSTpandGSTm

　　GAOMin,JIANGWei,SUNShuai,LUOLan.

　　(SchoolofLifeSciences,NanjingUniversity,JiangsuNanjing210093,China)

　　Abstract:ObjectiveTocomparetheinhibitingeffectofVSMCsproliferationandSTAT3phosphorylationbyGSTpandGSTm,andstudythemechanismofGSTp'sinhibitingeffect.MethodsVSMCsweretransfectedwithGSTp,GSTmandY7FplasmidandstimulatedbyAngiotensinⅡ.MTTassaywasusedtomeasuretheeffectofVSMCsproliferation,andwesternblotwasusedtomeasurephosphorylationofSTAT3.ResultsBothGSTpandGSTminhibitedVSMCsproliferationandSTAT3phosphorylationsignificantly,butGSTphadastrongereffectsthanGSTm;TheinhibitionbyY7FwasweakerthanGSTpandGSTm.ConclusionGSTpinhibitsproliferationofVSMCsstrongerthanGSTm,andthisfunctionmayconnectwithitstransferaseactivity.ThesefindingsprovideanewinsightforunderstandingtheroleofGSTpinmaintainingstabilityofvascularsmoothmusclecellsanddecreasingtheriskofatherosclerosisoccurrence.

　　Keywords:vascularsmoothmusclecells,proliferation,GSTp,GSTm

　　谷胱甘肽转移酶（GlutathioneS-Transferases），在人体内广泛存在，其作用是催化谷胱甘肽与亲电子物质反应，以降低胞内异源物质的攻击[1]。GSTp是GST超家族中的一员，对细胞增殖和凋亡的信号转导具有独特的调控作用[2]。GSTm同属于GST超家族，它可抑制血管平滑肌细胞（VSMCs）的增殖[3]。但目前研究尚未对两者的抑制作用进行比较，也未阐明GSTp调控VSMCs增殖的具体机制。本实验旨在比较GSTp与GSTm对抑制血管紧张素II（AngⅡ）引起的VSMCs过度增殖的作用，并探讨GSTp的作用机制。

　　1材料与方法

　　1.1实验材料一抗与二抗均购自CellSignaling公司；MTT和血管紧张素Ⅱ购自Sigma公司；脂质体转染试剂盒LipofectamineLTX购自Invitrogen公司。

　　1.2检测方法

　　1.2.1VSMCs的分离与培养取大鼠胸主动脉，用手术刀片切成1mm2的小组织块，于CO2培养箱中静置5h后将培养瓶翻转，继续静置于培养箱中5d。待细胞长至80%汇合后即可传代。

　　1.2.2脂质体转染将细胞接种于6孔板中，按试剂盒说明书进行操作。将配制好的转染液滴加到细胞表面。随后放入培养箱孵育5h，再更换20%FBS的DMEM培养液。

　　1.2.3MTT法检测VSMCs增殖将细胞以5000个/孔的密度接种到96孔板，每孔体积200μl，设6个复孔。待细胞转染后24h，加入AngII100nM刺激24h。随后每孔加入20μlMTT溶液孵育4h。吸弃孔内溶液后每孔加入150μlDMSO，振荡10分钟。选择490nm波长，在酶标仪上测定各孔吸光度。

　　1.2.4Westernblot将细胞裂解物于12500g离心15min并收取上清液。加入loadingbuffer，100℃水浴5min。随后进行SDS-PAGE电泳并转膜。用含5%脱脂奶粉的TBST室温封闭1h，加入一抗4℃孵育过夜。第二天加入二抗，室温避光孵育1h。随后使用Odyssey系统显色。每组实验重复3次。

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