2.3 系统适应性

　　分别取阴性样品、混合对照品及供试品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图（图1），结果表明，供试品色谱中苦参碱和蛇床子素保留时间分别为7.6 min和19.9 min，与对照品溶液的保留时间一致；阴性样品在该色谱条件下对供试品测定无干扰，分离度良好。理论塔板数以苦参碱色谱峰计算应不低于3000，以蛇床子素峰计算应不低于30 000。

　　2.4 线性关系

　　精密吸取苦参对照品储备液、蛇床子素对照品工作液适量至同一容量瓶中，加甲醇定容至5.0 mL，配制成含苦参碱和蛇床子素分别为：1237.5和36.8、900.0和22.1、630.0和8.8、450.0和3.5、315.0和1.4、225.0和0.6 μg/mL的系列混合对照品溶液。分别进样20 μL，记录峰面积。以对照品浓度（C）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线得苦参碱、蛇床子素的回归方程及相关系数分别为：A1=17 737C1-55 443，r = 0.9998；A2=87 876C2+12 670，r = 0.9999。结果表明，苦参碱和蛇床子素浓度分别在225.0～1237.5 μg/mL和0.6～36.8 μg/mL范围内线性关系良好。

　　2.5 精密度试验

　　精密取同一混合对照液连续进样6次，苦参碱和蛇床子素的RSD分别为1.0%（n = 6）和0.6%（n = 6），表明仪器精密度良好。

　　2.6 稳定性试验

　　取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h进样测定，记录峰面积。苦参碱和蛇床子素的RSD分别为1.1%（n = 6）和4.0%（n = 6），表明样品室温放置12 h内稳定性良好。

　　2.7 重复性试验

　　取同一批号样品6份，按"2.2.2"项下方法制备6份供试品溶液，进样测定含量。结果，苦参碱和蛇床子素的RSD分别为1.4%（n = 6）和2.4%（n = 6），表明该方法重复性良好。

　　2.8 加样回收率试验

　　精密取4 mL已知含量的样品9份，分别置10 mL离心管中，分别加入一定量的苦参碱、蛇床子素对照液，按"2.2.2"项下方法制成供试品溶液，依法测定。结果苦参碱和蛇床子素的平均回率分别为97.96%和101.31%，RSD分别为3.63%和4.02%，见表1、2。

　　3 讨论

　　在流动相的选择中，分别尝试用不同比例的乙腈-0.2%三乙胺做为流动相进行等梯度洗脱，结果表明，苦参碱和蛇床子素的极性差异较大，且该制剂杂质多，用等梯度流动相难以进行分离测定。曾采用甲醇-水系统作为流动相进行梯度洗脱，结果样品中苦参碱与其他杂质也不易分离[3]。对不同pH值的流动相进行了试验，结果表明：pH值对苦参碱色谱峰影响较大，pH值过低，苦参碱出峰过快；pH值过高，苦参碱色谱峰有拖尾现象；流动相pH为7.0时，分离效果最好。

　　文献方法检测苦参碱和蛇床子素分别采用220 nm[3-7]和320 nm[8-10]波长。试验表明：在320 nm波长下未能检测出苦参碱色谱峰；在220 nm波长下，蛇床子素色谱峰过小，与杂质未能完全分离，且基线漂移较大。改用220 nm和320 nm双波长检测，可同时完成对苦参碱和蛇床子素的分离测定。

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